本作主人公“杀手先生”（樱井孝宏 配音）是一名职业杀手，只要接到委托就什么都杀，甚至是自己的父母或者是小学生的暑假作业。他有个弟子，是父母双亡的小学生，因为崇拜杀手先生而拜其为师。登场人物还有要向杀手先生报杀父之仇的17岁巨乳美少女、与杀手先生有多次近距离接触的警长、一条名为“五郎”的警犬。本动画每集篇幅为3分钟，充满了大量令人捧腹的冷笑话，可以说是以杀手先生为中心的冷笑话集锦。杀手先生虽然长相帅气，为人冷酷，实际上是个冷面笑匠，与美少女、警长等角色的接触中，产生各种超乎意料的搞笑桥段。本动画改编自TAMACHIKU创作的四格漫画。
美山加恋,优香,坂口芳贞,谷育子,小川刚生,荒川大三郎,藤井皓太,桥本佳月,山本道子,中博史,高桥耕次郎,冈田吉弘,前田义信,福岛桂子,山口登,细谷佳正,宫崎宽务,光藤真白,高田始圣,田中绫,藤村天羽,武田幸史,岛崎信长,长岛雄一,山寺宏一,西田敏行
竹内顺子,植木诚,铃木真仁
三木真一郎,子安武人,关智一,細井治,矢尾一树,岩田光央,高木涉,有本钦隆,石冢运升
松冈由贵,杉田智和,平野绫,小野大辅,茅原实里,后藤邑子,桑谷夏子,白石稔,绪方贤一,小伏伸之
冈本信彦,堀江瞬,日笠阳子,早见沙织
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