电视动画《少女爱上姐姐》改编自Caramel Box于2005年发售的十八禁恋爱喜剧冒险游戏《处女爱上姐姐（処女はお姉さまに恋してる）》（全年龄版称为《少女爱上姐姐》）。动画的标题采用了全年龄的PS2版《少女爱上姐姐》。故事的主角——镝木财阀的独生子，长相清秀，成绩出众却有点弱气的的“好青年”宫小路瑞穗，因听从祖父的遗愿，被强迫送入一所女子学园就学，为了避免很多不必要的麻烦（或者是为了制造更多麻烦？），在青梅竹马的真里野的强烈要求下，他被迫换上了女装，在一群姐姐妹妹当中开始了“幸福”的校园生活，还误打误撞地被选为了全校学生所憧憬的“大姐样”。在小姐云集的女学园中引发轩然大波的瑞穗同学的未来会怎么样呢？
美山加恋,优香,坂口芳贞,谷育子,小川刚生,荒川大三郎,藤井皓太,桥本佳月,山本道子,中博史,高桥耕次郎,冈田吉弘,前田义信,福岛桂子,山口登,细谷佳正,宫崎宽务,光藤真白,高田始圣,田中绫,藤村天羽,武田幸史,岛崎信长,长岛雄一,山寺宏一,西田敏行
竹内顺子,植木诚,铃木真仁
三木真一郎,子安武人,关智一,細井治,矢尾一树,岩田光央,高木涉,有本钦隆,石冢运升
松冈由贵,杉田智和,平野绫,小野大辅,茅原实里,后藤邑子,桑谷夏子,白石稔,绪方贤一,小伏伸之
冈本信彦,堀江瞬,日笠阳子,早见沙织
长谷川育美,岛崎信长,伊濑茉莉也,土岐隼一,立花慎之介,小野大辅,福原克己
